闪式提取器提取枇杷叶总多酚方法：

　　1. 2. 1 总多酚含量测定

　　采用 Folin - Ciocalteu 方法绘制总多酚含量测定标准曲线[13]。精密称定 10. 2 mg 干燥至恒重的没食子酸标准品，置100 mL 容量瓶中，用质量分数 60% 乙醇超声溶解并定容至刻

　　度，获得 102 μg·mL-1 没食子酸标准品溶液。精密量取该溶液 0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mL 置于 10 mL 容量瓶中， 依次精密加入 Folin- Ciocalteu 试液 0. 5 mL，振摇 1 min，20%

　　Na2 CO3 溶液 2 mL，振摇 1 min，加双蒸水至刻度，室温显色60 min 后，在 760 nm 处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标， 浓度为横坐标，进行线性回归，得到吸光度( y) 与总多酚浓度

　　( x) 的方程为: y = 0. 0143x+0. 003 ( 相关系数为 R2 = 0. 9996) ， 结果表明没食子酸在 10. 2 ～ 102 μg·mL-1 浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。

　　1. 2. 2 枇杷叶总多酚的提取及含量测定

　　精密称取粉碎过筛的枇杷叶样品粉末 1. 0 g，加入一定体积的不同质量分数乙醇溶液，闪式提取规定时间。提取混悬液 在 5000 r / min 下离心 10 min 后取上清液 1. 0 mL 置于 10 mL 容量瓶中，用质量分数 60% 乙醇定容至刻度得稀释液，取该稀释液 0. 2 mL，按 “1. 2. 1 总多酚含量测定” 项下操作，测定样品吸光度值，计算提取液中总多酚含量
 

　　1. 1 单因素实验结果

　　2. 1. 1 提取次数的选择

　　提取次数对枇杷叶总多酚提取得率的影响实验结果见图 1( A) 。由实验结果可知，一次闪式提取就能够获得较高的总多酚提取得率，提取 2 次后，总多酚得率几乎达到最高值， 再增加提取次数，总多酚得率没有显著增加 ( p >0. 05) ，因此

　　在考察其他因素时，固定闪式提取次数 2 次为最佳提取次数。

　　2. 1. 2 乙醇质量分数的选择

　　不同质量分数乙醇对枇杷叶总多酚提取得率的影响实验结 果见图 1( B) 。由实验结果可知，枇杷叶总多酚提取得率随乙醇质量分数的增加而明显增加，在乙醇质量分数到达 60% 时达到最高值，随后显著下降，这可能是因为枇杷叶中的多酚类 化合物的极性与质量分数 60% 的乙醇极性相当，根据相似相

　　溶的原理，在质量分数 60% 的乙醇中溶解度最大，因此选择

　　乙醇质量分数为 60% 作为响应面法优化的中心点。

　　2. 1. 3 闪式提取时间的选择

　　闪式提取时间对枇杷叶总多酚提取得率的实验结果见 图 1( C) 。由图 1( C) 可知，在提取时间 120 s 内枇杷叶总多酚提取得率随提取时间的延长而显著升高，当提取时间超过120 s 后总多酚得率呈现较为明显的下降趋势，这主要是由于提取时 间过长，加速了其他非多酚类物质的溶解释放，从而降低了总 多酚的提取得率，因此选择提取时间为 120 s 作为响应面法优化的中心点。

　　2. 1. 4 料液比的选择

　　不同料液比对枇杷叶总多酚提取得率的实验结果见图 1( D) 。由图 1( D) 可知，料液比对枇杷叶总多酚提取得率的影响要小于乙醇质量分数和提取时间的影响，在料液比30 mL·g-1时获得了较佳的总多酚得率，因此选择料液比为 30 mL·g-1 作为响应面法优化的中心点。