红树莓，又称莓托盘、红马林等，因其富含多种人体必需的营养成分，且具有多种医药疗效，被列为世界第三代水果。红树莓果实中含有丰富黄酮、酚酸、鞣花酸等多酚类化合物，许多关于红树莓功能性研究表明，红树莓中的这些多酚类化合物对癌症、糖尿病、肥胖等疾病有抑制作用，因此已成为食品与保健品研究的焦点。
在研究多酚的提取工艺的过程中，越来越多的新技术被引进，如微波辅助提取法、超声波辅助提取法、超高压提取法等，但这些提取方法耗时长、效率低且操作繁琐，且容易导致植物多酚在提取过程中发生降解。闪式提取技术是一种新型提取方法，近年来该技术被广泛的应用在植物活性成分提取方面，它利用高速机械剪切力和超动分子渗滤技术，将物料组织迅速破碎至细微颗粒，然后使物料组织内部的有效成分迅速进入溶剂中，瞬间达到溶剂浓度的平衡，通过与溶剂充分接触，快速提取物料中的有效成分。闪式提取法具有提取时间短、提取效率高和操作简单等特点，且很好的解决了植物多酚在提取过程中因时间过长导致温度过高引起降解的问题。近年来有文献报道了闪式提取技术应用在黄芪、肉苁蓉、山杏仁种皮等植物中活性成分的提取中，提取效果较好。目前闪式提取法在红树莓活性成分提取方面的研究较少。
1.2 实验方法
1.2.1 红树莓样品的处理 红树莓鲜果( －70 ℃ 下迅速冻结) →真空冷冻干燥( － 43 ℃，12 h) →粉碎过筛( 40 目) 4 ℃储存备用。
1.2.2 多酚提取的工艺流程 取 4 g 红树莓样品粉末溶于 150 mL 溶剂→闪式提取→抽滤得滤液→( 95% 乙醇) 醇沉静置收集上层清液→红树莓多酚粗提物。
准确称取 4 g 红树莓样品粉末溶于 150 mL 的溶剂中搅拌混匀，将混匀的样品溶液利用
闪式提取器在一定的提取电压( 由于受闪提器自身的原因，实验电压参数只能在 100～200 V 范围内设置) 和提取时间下进行提取，将提取后的样品溶液进行抽滤，收集滤液，并将该滤液在 95% 的乙醇溶液中进行 12 h 醇沉，收集上层溶液得红树莓多酚粗提物。
1.2.3 没食子酸标准曲线的绘制及多酚含量的计算 多酚含量测定参考李杰［11］、Teng H 等［12］方法，采用福林酚法测定，以没食子酸为基准物，得没食子酸标准曲线吸光值对浓度的线性回归方程为: y = 3.7583x + 0.0603，Ｒ2 = 0.9971。根据没食子酸标准曲线回归方程计算树莓多酚含量。多酚提取量计算公式:多酚提取量 TPC( mg /g) = ( V × C) /m 式( 1)式( 1) 中: m － 样品质量，g; V － 提取液的体积， mL; C－样品中多酚浓度，mg /mL。
1.2.4 单因素实验设计 选取溶剂类型、溶剂浓度、提取电压、提取时间为考察因素，以红树莓多酚提取量为指标进行单因素实验。
1.2.4.1 溶剂类型因素的影响 分别准确称取 4 g 红树莓冻干物粉末，按料液比 4 g∶ 150 mL 各加入 150 mL超纯水、50%乙醇、无水乙醇、氯仿、石油醚，提取时间为 60 s，电压 120 V，提取液经过滤，定容，根据 1.2.3 计算多酚提取量，每组重复 3 次平行实验。
1.2.4.2 溶剂浓度因素的影响 分别准确称取 4 g 红树莓冻干物粉末，按料液比 4 g∶ 150 mL 各加入 150 mL超纯水、25% 乙醇、50% 乙醇、75% 乙醇、无水乙醇，提取时间为 60 s，电压 120 V，提取液经过滤，定容，根据 1.2.3 计算多酚提取量，每组重复 3 次平行实验。 1.2.4.3 提取电压因素的影响 分别准确称取 4 g 红树莓冻干物粉末，按料液比 4 g∶ 150 mL 各加入 150、 50 mL 50% 乙醇溶液，提取电压分别设定为 0、100、 125、150、175、200 V，提取时间为 60 s，提取液经过滤，定容，根据 1.2.3 计算多酚提取量，每组重复 3 次平行实验。
1.2.4.4 提取时间因素的影响 分别准确称取 4 g 红树莓冻干物粉末，按料液比 4 g∶ 150 mL 各加入 50% 乙醇，提取时间分别设定为 20、40、60、80、100 s，提取电压为 150 V，提取液经过滤，定容，测定计算，每组重复 3 次平行实验。
1.2.5 响应面实验设计 根据 Box－ Behnken 中心组合实验设计原理，参考宋思圆等［13－16］方法并稍作修改，综合单因素实验结果，以乙醇溶液为提取剂，选取对树莓总多酚提取量影响较大的因素乙醇体积分数( A) 、提取电压( B) 和提取时间( C) ，进行中心组合实验。以多酚提取量( mg /g) 为响应值，通过响应面分析得出闪式提取树莓中总多酚的最佳提取工艺条件。实验设计因素编码及水平见表 1
1.2.6 红树莓多酚提取液抗氧化能力测定
1.2.6.1 对 DPPH·清除能力 参考王毕妮［17］等人方法并稍作修改。准确称取 0.0039 g DPPH·粉末溶于无水乙醇定容至100 mL，室温下平衡 2 h 备用。分别取 1 mL 样品于试管中，加入 9 mL DPPH·溶液，暗反应 30 min 后测其在 517 nm 处的吸光值，以乙醇为空白对照。Trolox 为阳性对照。重复 3 次平行实验。
